實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的儀器和實(shí)驗(yàn)室耗材有哪些？

更新時(shí)間：2022-03-25

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用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室耗材有很多種，進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需的基本設(shè)備如下：

設(shè)備	有益設(shè)備	有用的附加設(shè)備
振蕩培養(yǎng)箱	生物安全柜	低溫冷凍柜
顯微鏡	細(xì)胞計(jì)數(shù)儀	玻璃器皿清洗機(jī)
滅菌器	真空泵	菌落柜臺
清洗儀器	二氧化碳培養(yǎng)箱	共聚焦顯微鏡
殺菌干燥箱	制備和質(zhì)量控制	熒光激活細(xì)胞分選儀
離心機(jī)	溫度記錄
純水機(jī)	細(xì)胞生物反應(yīng)器
液氮罐	移液器和自動(dòng)移液器
水浴鍋

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室所需基本設(shè)備清單：

1. 無菌工作區(qū)/細(xì)胞培養(yǎng)罩（即層流罩或生物安全柜）

2. 培養(yǎng)箱（推薦使用潮濕的二氧化碳培養(yǎng)箱）

3. 水浴

4. 離心機(jī)

5. 冰箱和冰柜 (–20°C)

6. 細(xì)胞計(jì)數(shù)器（例如自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或血細(xì)胞計(jì)數(shù)器）

7. 倒置顯微鏡

8. 液氮 (N ₂ ) 冷凍箱或低溫儲(chǔ)存容器

9. 滅菌器（即高壓滅菌器）

細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備

1 、細(xì)胞培養(yǎng)所需的無菌工作區(qū)：

§ 為了保持清潔的細(xì)胞培養(yǎng)工作，如果可能，有必要準(zhǔn)備一個(gè)單獨(dú)的房間或空間。

§ 這個(gè)房間應(yīng)該是密閉的，另外需要配備一個(gè)氣流柜，已提供潔凈的空氣，一些實(shí)驗(yàn)室還會(huì)采用HEPA空氣過濾器。實(shí)驗(yàn)室必須是為潔培養(yǎng)工作二設(shè)計(jì)，嚴(yán)格限制在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或附近培養(yǎng)原代動(dòng)物組織和微生物。

§ 實(shí)驗(yàn)室外套應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室入口處，不得在實(shí)驗(yàn)室外使用。

§ 生物安全柜既可以提供無菌的條件，而且還可以控制傳染性的飛濺物或氣溶膠。

§ 為滿足多樣化的研究需要，生物安全柜一般有I、II、III三類。

§ I 類層安全柜為實(shí)驗(yàn)室工作人員和環(huán)境提供了基本水平的保護(hù)，但它們不能保護(hù)培養(yǎng)物免受污染。它們在設(shè)計(jì)和氣流特性方面與化學(xué)通風(fēng)柜基本相同。

§ 對于涉及 BSL-1、2 和 3 材料的工作或者細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)為了處理有害物質(zhì)（例如，靈長類動(dòng)物培養(yǎng)物、病毒感染培養(yǎng)物、放射性同位素、致癌或有毒試劑），應(yīng)使用 II 類生物安全柜。

§ 清潔工作臺：垂直層流或水平層流潔凈工作臺是將經(jīng)過 HEPA 過濾的空氣從機(jī)柜后部穿過工作臺表面有助于保護(hù)樣品而不是工作人員。

2.振蕩培養(yǎng)箱：

§ 為了在 30-40 ⁰ C下為細(xì)胞生長提供合適的溫度環(huán)境，需要一個(gè)培養(yǎng)箱。

§ 根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞類型，孵育溫度會(huì)有所不同。

§ CO2 振蕩培養(yǎng)箱時(shí)一種可以自動(dòng)進(jìn)行控溫、濕度和氣體調(diào)節(jié)的培養(yǎng)箱，可以使培養(yǎng)基中，CO2 的濃度與碳酸氫鈉保持平衡。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，一般保持培養(yǎng)箱中保持 2-5% CO2 氣體含量。

3.用于標(biāo)本保存的超低溫冰箱和低溫冰柜（-20 ° C）：

§ 冰箱和冰柜對于在 2–8°C 下儲(chǔ)存液體培養(yǎng)基以及在 –5°C 到 –20°C 下儲(chǔ)存酶和某些培養(yǎng)基成分都非常重要。

§ 要儲(chǔ)存培養(yǎng)基和緩沖液，需要冰箱或冷藏室。

§ 需要低溫冰箱來保存預(yù)先分裝的血清、營養(yǎng)物質(zhì)和抗生素。

§ 低溫儲(chǔ)存

§ 隨著傳代次數(shù)的增加，連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞系遺傳不穩(wěn)定的可能性很大，因此，有必要制備細(xì)胞的工作原液并保存在低溫儲(chǔ)存中。

§ 需要注意的是，細(xì)胞不應(yīng)儲(chǔ)存在 20 ^o C 或 -80 ^o C 的冰箱中，因?yàn)楫?dāng)它們不在這些溫度下儲(chǔ)存時(shí)，它們的活力會(huì)降低。

4.顯微鏡：

§ 檢查細(xì)胞一般使用倒置顯微鏡即可。

§ 盡管染色體分析或放射自顯影工作需要非常高質(zhì)量的顯微鏡，但放大倍數(shù)為 X100 的簡單的光學(xué)顯微鏡足以在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

5 、組織培養(yǎng)器皿：

§ 多種組織培養(yǎng)塑料器皿，最常見的是經(jīng)過特殊處理的聚苯乙烯。

§ 少量的細(xì)胞培養(yǎng)一般在25 cm2 或 75 cm2培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶中進(jìn)行，而后再轉(zhuǎn)移至搖瓶中，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中擴(kuò)培，大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)還需要借助生物反應(yīng)器等設(shè)備。

6.清洗消毒設(shè)施：

§ 玻璃器皿如移液器應(yīng)浸泡在合適的清潔劑中，然后經(jīng)過嚴(yán)格的洗滌程序，在干燥和滅菌之前用蒸餾水*浸泡。

§ 玻璃器皿如移液管、錐形瓶、燒杯（用鋁箔覆蓋）在 160°C 的熱空氣烘箱中消毒一小時(shí)。

§ 所有其他設(shè)備，如自動(dòng)移液器吸頭和瓶子（蓋子松散連接）均通過 121 °C 高壓滅菌 20 分鐘進(jìn)行滅菌。

7.純水制備或反滲透裝置：

§ 為了準(zhǔn)備培養(yǎng)基和沖洗玻璃器皿，需要雙蒸或反滲透水供應(yīng)。

§ 應(yīng)定期檢查雙蒸水的 pH 值，因?yàn)樵谀承┣闆r下可能會(huì)有所不同。

§ 使用的水質(zhì)量的變化可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的變化，因此有必要使用單一來源的水。

§ 通過高壓滅菌將水在 121 °C 下滅菌 20 分鐘。

8.過濾除菌

§ 不能高壓滅菌的培養(yǎng)基必須通過孔徑為 0.22 μm 的膜過濾器進(jìn)行滅菌。

9.離心機(jī)

§ 為了增加細(xì)胞濃度或洗去試劑，細(xì)胞懸液需要進(jìn)行離心操作。

§ 可以使用的離心機(jī)有臺式離心機(jī)、小型離心機(jī)、落地式離心機(jī)和冷凍離心機(jī)等。

其他擴(kuò)展設(shè)備和附加用品：

§ 用于動(dòng)物培養(yǎng)的其他附加實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室耗材如下：

§ 蠕動(dòng)泵貨真空泵

§ PH計(jì)

§ 細(xì)胞生物反應(yīng)器【大規(guī)模培養(yǎng)】

§ 共聚焦顯微鏡

§ 流式細(xì)胞儀

§ 細(xì)胞培養(yǎng)瓶

§ 細(xì)胞培養(yǎng)皿

§ 滾瓶或搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶

§ 移液器和移液器吸頭

§ 廢物容器

§ 培養(yǎng)基、血清和試劑

§ 細(xì)胞

1. pH計(jì)：

§ PH計(jì)是一種計(jì)算溶液中氫離子（酸度或堿度）活度的電子儀器。

§ pH 計(jì)必須包括連接到 pH 響應(yīng)電極和參考（不變）電極的電壓表。

§ pH 響應(yīng)電極通常是玻璃，汞-氯化亞汞（甘汞）電極通常是參考電極，但有時(shí)也使用銀-氯化銀電極。

2.共聚焦顯微鏡：

§ 共聚焦顯微鏡是一種特殊類型的標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡（也稱為寬場熒光顯微鏡），它使用特定的光學(xué)組件產(chǎn)生用熒光探針染色的材料的高分辨率圖像。

3 . 流式細(xì)胞儀：

§ 流式細(xì)胞術(shù)是一種細(xì)胞分析方法，在 1950 年代用于確定流體流中的細(xì)胞體積，當(dāng)它們在觀察孔前流動(dòng)時(shí)，流體流會(huì)快速循環(huán)。

§ 流體、光學(xué)和電子是流式細(xì)胞儀的三個(gè)主要組成部分。

§ 樣品從樣品管到流動(dòng)池的傳輸是流式細(xì)胞儀的流體系統(tǒng)的功能。

§ 樣品要么被分選（在細(xì)胞分選機(jī)的情況下），要么在通過流通池（并通過激光）后被運(yùn)送到廢物中。

§ 光學(xué)系統(tǒng)組件包括激發(fā)光源、透鏡和用于在儀器周圍捕獲和移動(dòng)光的濾光片以及光電流產(chǎn)生檢測系統(tǒng)。

4 . 細(xì)胞培養(yǎng)容器：

§ 所有的培養(yǎng)細(xì)胞的容器起初都是玻璃的。

§ 與塑料相比，玻璃的缺點(diǎn)包括重量大、成本高、清潔勞動(dòng)強(qiáng)度大和顯微鏡觀察效果差。

§ 1960 年代為聚苯乙烯開發(fā)了表面處理技術(shù)，使塑料容器能夠代替玻璃用于大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用。

培養(yǎng)瓶瓶說明	生長面積(cm ² )	推薦工作體積 (ml)	細(xì)胞產(chǎn)量
T-25	25	5-10	2.5×10 ⁶
T-75	75	15-25	7.5×10 ⁶
T-150	150	30-50	15.0 X 10 ⁶
T-175	175	35-60	17.5 X 10 ⁶
T-225	225	45-75	22.5 X 10 ⁶

A.。細(xì)胞培養(yǎng)皿：

§ 細(xì)胞培養(yǎng)皿提供了較佳的經(jīng)濟(jì)性和進(jìn)入生長表面的途徑。

§ 它們應(yīng)該與二氧化碳振蕩培養(yǎng)箱一起使用。

§ 大多數(shù)制造商提供四種培養(yǎng)皿：35 毫米、60 毫米、100 毫米和 150 毫米。

§ 細(xì)胞培養(yǎng)皿主要用于培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。

細(xì)胞培養(yǎng)皿說明	生長良好 (cm ² )	工作容積(ml)	細(xì)胞產(chǎn)量
96孔	0.32	0.1-0.2	0.32×10 ⁵
48孔	1.00	0.3-0.6	0.8×10 ⁵
24孔	1.88	0.5-1.2	1.9×10 ⁵
12孔	3.83	1.0-2.4	3.8×10 ⁵
6孔	9.40	2.0-3.0	9.5×10 ⁵

B。 滾瓶：

§ 為了增加貼壁細(xì)胞數(shù)量，一般使用滾瓶、搖瓶培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的使用與燒瓶基本相同但勞動(dòng)力大大減少。

滾瓶的說明	生長面積（cm ²）	工作容積(mL)	細(xì)胞產(chǎn)量
小的	490	100-150	4.9×10 ⁵
標(biāo)準(zhǔn)	850	170-250	8.5×10 ⁵
制藥	1750	340-500	17.5 X 10 ⁵

C . 移液器和移液管：

§ 血清移液管是一種相對常見的實(shí)驗(yàn)室儀器，用于轉(zhuǎn)移毫升體積的液體。

§ 為了計(jì)算被吸出或分配的液體體積，血清移液管通常沿其側(cè)面有刻度。

§ 這些儀器最常與移液器分液器一起使用，通過產(chǎn)生部分真空來增強(qiáng)液體轉(zhuǎn)移。

§ 根據(jù)您想要通過的體積量，相同的移液器分液器可與多種血清移液器尺寸一起使用。

§ 血清移液管通常是可消毒和可重復(fù)使用的，可以是塑料的、無菌的、一次性的或玻璃的。

§ 對于液體的轉(zhuǎn)移可使用移液器來進(jìn)行操作。

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