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    蛋白質電泳常用試劑配制方法

    更新時間:2023-06-13點擊次數:5232

    蛋白質電泳常用試劑配制方法如下:

    一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制

    3×SDS-PAGE loading buffer10ml
    1M Tris-Hcl (PH 6.8)1.5ml
    SDS0.6g
    BPB(溴酚藍)30mg
    甘油(丙三醇)3ml
    去離子水5.5ml

    1、將除BPB以外的藥品溶解。SDS常溫下很難溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,進行溶解;

    2、把溶好的buffer分裝到1.5ml的離心管中,1ml/管,常溫放置;

    3、使用前,每管加入30µL巰基乙醇。

    注意事項:巰基乙醇為危險品,加入的過程在通風櫥中完成,并且?guī)Ш檬痔住?/p>

    二、10×PBS的配制

    0.1M PBS(10×PBS)1L
    NaH2PO4.2H2O2.83g
    Nacl85g
    Na2HPO4.12H2O28.98g

    1、用去離子水將以上藥品進行溶解;(溶解的非常慢,可能需要過夜)

    2、調PH值到7.2,用0.4µm的濾膜過濾。常溫保存;

    3、工作時用的是1×PBS。

    三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制

    1.5M Tris-Hcl250ml
    Tris45.425g

    1、用200ml去離子水將Tris溶解。

    2、用濃鹽酸調PH值到8.8。

    3、調好PH的Tris-Hcl定容到250ml。

    4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。

    注意事項:Tris的緩沖能力很強,調PH值時,費些時間,但不要調過。

    四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制

    1M Tris-Hcl250ml
    Tris30.275g

    1、用200ml去離子水將Tris溶解;

    2、用濃鹽酸調PH值到6.8;

    3、調好PH的Tris-Hcl定容到250ml;

    4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。

    五、30%丙烯酰胺的配制

    30%丙烯酰胺250ml
    丙烯酰胺72.5 ml
    BIS甲叉丙烯酰胺2.5 ml

    1、把藥品用去離子水溶解后定容到250ml;

    2、用濾紙過濾,放在棕色瓶子中,4℃保存。

    注意事項:兩種藥品有毒性,配制過程要帶手套和口罩。

    六、10%SDS的配制

    1.1g SDS加入10ml去離子水進行溶解;

    2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

    七、10%過硫酸銨的配制

    1.1g 過硫酸銨加入10ml去離子水進行溶解。

    2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。

    八、5×SDS-PAGE電泳緩沖液的配制

    5×SDS-PAGE電泳緩沖液1L
    Tris15.1g
    Glycine(甘氨酸)94g
    SDS5g

    將以上藥品用去離子水溶解后定容到1L,常溫保存。工作時用的是1×SDS-PAGE電泳緩沖液。

    九、考馬斯亮藍R-250染色液的配制

    1、往1g考馬斯亮藍R-250中加入250ml異丙醇,在磁力攪拌器上攪拌六小時以上;

    2、加入650ml去離子水,磁力攪拌器攪拌過夜;

    3、再加入100ml冰醋酸進行溶解,磁力攪拌器攪拌;

    4、在通風櫥內用濾紙進行過濾。常溫保存。染色液只能反復用兩次。

    注意事項:在磁力攪拌器上攪拌時,要把容器封口。

    十、脫色液的配制

    脫色液1L
    醋酸(冰乙酸)100ml
    乙醇(無水乙醇)50ml
    去離子水850ml

    常溫保存。

     蘇州阿爾法實驗器材有限公司14年專注于生物實驗室儀器設備與實驗耗材和生物試劑的專業(yè)供應商,迄今為止已服務1000+客戶。主要經營的儀器類產品包括恒溫振蕩培養(yǎng)箱 ,二氧化碳搖床,全溫振蕩培養(yǎng)箱,振蕩培養(yǎng)箱,Rainin移液器,培養(yǎng)箱,霉菌培養(yǎng)箱,生物反應器,發(fā)酵罐,二氧化碳培養(yǎng)箱,液氮罐,超純水機,天平,離心機、潔凈工作臺等。廠商企業(yè)授權包括知楚儀器、朗基、中科美菱,梅特勒,樂楓,搏旅、NEST、天根、奧盛等80余家。另外還有細胞培養(yǎng)試劑、腫瘤細胞、天根試劑盒、碧云天試劑、阿拉丁試劑、過氧化氫消毒液、季銨鹽消毒劑、復方季銨鹽消毒液、殺孢子劑、醇類消毒液、濃縮消毒液、除霉菌消毒液、無塵布、潔凈抹布、滅菌拖把等廣泛應用于生命科學、醫(yī)院、制藥企業(yè)、醫(yī)藥研發(fā)、疾控防御、檢驗檢疫等多種場景。


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